Prinsip asas elektroforesis

Elektroforesis

Asas prinsip elektroforesis

Elektroforesis merujuk kepada proses yang berhijrah zarah bercas dalam medan elektrik. Banyak molekul biologi penting, seperti asid amino, peptida, protein, nukleotida, asid nukleik dan sehingga memiliki kumpulan ionizable, mereka boleh secara positif atau negatif dikenakan pada pH tertentu, di bawah tindakan medan elektrik, yang didakwa membawa molekul yang bergerak ke arah caj elektrod arah kutub yang berlawanan. Teknik elektroforesis adalah penggunaan dalam bidang elektrik, molekul itu sendiri dan perbezaan disebabkan saiz, bentuk, dan ciri-ciri lain yang pelbagai molekul untuk dipisahkan dalam hartanah mengenakan bayaran sampel, molekul dikenakan kadar penghijrahan yang berbeza, dan dengan itu sampel telah diasingkan, dikenalpasti atau teknologi disucikan.

Proses elektroforesis mesti dilakukan dalam medium sokongan. Tiselius et al. 1937 percuma antara muka elektroforesis dijalankan tidak sederhana tetap sokongan, jadi resapan dan olakan daripada kesan yang kuat perpisahan. Jadi ada medium sokongan tetap elektroforesis, sampel telah ditaklukkan kepada proses elektroforesis dalam medium tetap, mengurangkan penyebaran kesan gangguan dan perolakan. Sederhana sokongan awal adalah kertas dan selulosa asetat membran, kini media ini di dalam makmal telah digunakan kurang. Bagi tempoh masa yang panjang, molekul kecil seperti asid amino, peptida, gula atau seperti yang biasanya dilakukan menggunakan kertas penapis daripada selulosa, gel silika plat lapisan nipis untuk sederhana pemisahan elektroforetik, analisis, tetapi biasanya menggunakan teknik lebih sensitif seperti HPLC dan seumpamanya dianalisis. Ini media sesuai untuk pemisahan molekul kecil, mudah, dan mudah. Tetapi untuk pemisahan makromolekul biologi kompleks kurang berkesan. Gel sebagai medium sokongan diperkenalkan sangat menggalakkan pembangunan teknologi elektroforesis, teknologi telah menjadi satu cara yang penting dalam analisis elektroforetik protein, asid nukleik dan makromolekul biologi lain. Gel pada mulanya menggunakan kanji gel, tetapi yang paling banyak digunakan gel agarose dan polyacrylamide gel. Protein menggunakan polyacrylamide gel elektroforesis utama.

Peralatan elektroforesis terdiri daripada dua bahagian: Bekalan kuasa dan tangki elektroforesis itu. DC bekalan kuasa, menjana medan elektrik didorong penghijrahan molekul dikenakan dalam tangki elektroforesis itu. Tangki elektroforesis boleh dibahagikan kepada kategori mendatar dan menegak. Plat elektroforesis menegak adalah bentuk yang lebih umum, yang biasa digunakan dalam elektroforesis gel polyacrylamide pemisahan protein. Tangki elektroforesis Pertengahan dikepit bersama, kedua-dua kepingan kaca, pinggan kaca yang dipisahkan oleh jalur pada kedua-dua belah pihak, di tengah-tengah plat kaca yang disediakan gel elektroforesis, saiz gel yang biasanya 12cm & amp; akut; 14 cm, ketebalan 1mm ~ 2 mm, pada tahun-tahun kebelakangan ini, tangki elektroforesis yang baru dibangunkan, permukaan plastik adalah lebih kecil, nipis, reagen elektroforesis lebih pendek dan untuk menyelamatkan masa.Apabila anda meletakkan gam dalam larutan gel sikat plastik, selepas menanggalkan getah pempolimeran, membentuk alur pada sampel. Elektroforesis mendatar, gel meletakkan kaca mendatar atau plat plastik, dengan lapisan nipis kertas penapis lembap dan disambungkan gel elektroforesis penampan, atau terus tenggelam dalam penampan gel. Kerana mengubah pH molekul dikenakan menyebabkan perubahan dalam pertuduhan itu, yang sudah tentunya halaju penghijrahan elektroforetik, jadi proses elektroforesis yang hendak dijalankan di penampan yang sesuai, penampan boleh mengekalkan stabil mengecas hartanah menjadi mengasingkan.