Il principio di base di elettroforesi

Elettroforesi

La base principio di elettroforesi

Elettroforesi riferisce al processo delle particelle cariche migrano in un campo elettrico. Molti importanti molecole biologiche, come gli amminoacidi, peptidi, proteine, nucleotidi, acidi nucleici e quindi aventi gruppi ionizzabili, possono essere positivamente o negativamente soggette a pH specifico, sotto l'azione del campo elettrico, la carica proposto sue molecole si muovono verso la carica elettrodo direzione di polarità opposta. Elettroforesi tecnica è l'uso nel campo elettrico, la molecola stessa e la differenza a causa delle dimensioni, forma, e altre proprietà delle varie molecole da separare nelle proprietà di carica del campione, le molecole cariche hanno diversi tassi di migrazione, e quindi i campioni sono stati isolati, identificati o tecnologia purificati.

Processo elettroforesi deve essere effettuata in un mezzo di supporto. Tiselius et al. 1937 elettroforesi interfaccia libera effettuato nessun mezzo fissa di supporto, così la diffusione e convezione che il forte impatto della separazione. Quindi vi è un mezzo di supporto fisso dell'elettroforesi, il campione è stato sottoposto a processo di elettroforesi in un supporto fisso, riducendo l'effetto di interferenza diffusione e convezione. Supporto Il supporto iniziale è membrane di carta e di acetato di cellulosa, attualmente questi media in laboratorio è stato applicato meno. Per un lungo periodo di tempo, piccole molecole quali amminoacidi, peptidi, zuccheri o simili viene di solito effettuata utilizzando un filtro di carta di cellulosa, gel di silice piastra sottile strato per mezzo di separazione elettroforetica, analisi, ma è generalmente utilizzano tecniche più sensibili quali HPLC e simili analizzato. Questi mezzi idonei per la separazione di piccole molecole, semplici e convenienti. Ma per la separazione di macromolecole biologiche complesse meno efficace. Gel fungere da supporto introdotto fortemente promosso lo sviluppo della tecnologia elettroforesi, la tecnologia è diventata un importante strumento di analisi elettroforetica delle proteine, acidi nucleici e altre macromolecole biologiche. Gel inizialmente utilizzando gel di amido, ma più usato gel di agarosio e gel di poliacrilammide. Proteine ​​con gel di poliacrilamide elettroforesi importante.

Apparecchi Elettroforesi consiste di due parti: L'alimentazione e il serbatoio elettroforesi. Alimentazione DC, generare un campo elettrico azionato migrazione di molecole cariche nel serbatoio elettroforesi. Elettroforesi serbatoio può essere diviso in categorie orizzontali e verticali. Elettroforesi piastra verticale è una forma più comune, comunemente usato in SDS-PAGE di separazione delle proteine. Elettroforesi serbatoio intermedio viene serrato insieme, le due lastre di vetro, lastre di vetro separate da una striscia su entrambi i lati, nel centro del piatto di vetro preparati in elettroforesi su gel, il gel formato è tipicamente 12 centimetri & amp; acute; 14 cm, uno spessore di 1 mm ~ 2 mm, negli ultimi anni, elettroforesi di nuova concezione, superficie di plastica è più piccolo, più sottile, reagenti elettroforesi più brevi e per risparmiare time.When mettete la colla in una soluzione di gel pettine di plastica, dopo aver tolto la gomma polimerizzazione, formando una scanalatura sul campione. Elettroforesi orizzontale, il gel che sul vetro orizzontale o piastra di plastica, con un sottile strato di carta da filtro umida e buffer di elettroforesi su gel collegato, o direttamente immersa nel buffer gel. Poiché cambiando il pH delle molecole cariche provocare un cambiamento di carica, compromettendone il velocità di migrazione elettroforetica, in modo che il processo di elettroforesi da effettuare in un tampone adatto, il buffer può mantenere stabile proprietà di carica di essere isolato.